스파이더 마일즈에서는 다양한 적들이 등장합니다.
무기나 복장등을 통해서 구별해야 하며 각자의 공격과 방어패턴을 가지고 있습니다.
전작에 이어서 마일즈에는 적들이 진형에 따른 개성이 강해집니다.
이런 적들의 조합이 액션게임을 입체적으로 만듭니다.
옷만 다르고 무기와 패턴이 동일할 경우에는 하나만 소개합니다.

▶ 탈옥수
평범하게 감옥에서 탈옥한 적들로 기본적으로 런닝이나 주황색 체육복을 입고 있습니다.
단순하게 주먹만을 휘두릅니다.
기본적, 슬라임같은 놈들이죠

▶ 탈옥수 + 권총
권총을 쏘는 적입니다.
조준을 하면 스파이더센스가 작동하는데 회피버튼을 눌러서 피합니다.
마피아든지 뭐든지 권총을 든 적들은 모두 똑같습니다.
가까이 가면 권총을 휘두르기도 하지만 무시해도 좋은 일입니다.

▶ 기관총 + 불량배
기관총을 들고 있습니다. 권총과 같지만 데미지가 더 큽니다.
이 녀석들에게 틈을 주면 간간히 수류탄을 던지기도 합니다.

▶ 바주카 + 불량배
유도효과가 있는 바주카를 쏘는데 네모난 조준모양이 생깁니다.
타이빙에 맞추어 피해야 하고 스킬을 올리면 되돌려던지는게 가능합니다.
어쩌다 근접거리에서 쏘면 피할 수 없고 큰 데미지를 입습니다.

▶ 근접무기 + 불량배
겸자나 쇠파이프를 들고 있는 적은 평타를 막습니다.
막다가 반격하기도 하니 너무 안심하고 공격하지말고 피해야 합니다.
거미줄이나 어퍼등의 공격이 통합니다.

▶ 부르트
부르트들은 근접 공격이 통하지 않습니다.
물건을 던지거나 거미줄을 쏘는등 원거리공격을 하거나, 스턴을 걸고 때려야 합니다.
베놈계열의 공격으로 스턴을 걸수 있어서 전작에 비해 처리가 쉽습니다.

▶ 언더그라운드 싸움꾼
두꺼운 팔로 근접 공격을 막아내는 언더그라운드의 기본유닛입니다.
방어하다 점프해서 범위공격을 합니다.
기본적으로 거미줄과 베놈공격으로 제압 가능합니다.
그리고 물건던지기는 언제나 유효합니다.

▶ 언더그라운드 소총수
무기를 만드는 능력을 이용해서 총을 만드는 소총수입니다.
무기를 뺏어도 잠시 시간을 주면 다시 만들고 원거리공격을 합니다.
또 폭탄도 던지기 때문에 까다롭습니다.
수가 적을 때는 무기 던지기 기능으로 쉽게 제압이 가능합니다.

▶ 근접무기 + 록슨 경비대
패턴은 쇠파이프를 들고다니는 적들과 똑같습니다.
쇠파이프처럼 근접공격을 하는데 맞으면 마비기능을 추가로 들어옵니다.
한동안 거미줄을 사용할 수 없습니다.

▶ 록슨경비대 바주카
록슨 경비대의 바주카인데 스파이더맨을 포획하는 볼을 발사합니다.
바주카보다 피하기는 어렵지만 데미지는 약합니다.
다만 스턴을 걸기 때문에 더 조심해야 합니다.

▶ 록슨 방패병
록슨 경비대 방패병으로 근접공격을 막고 반격합니다.
공격을 하려면 무기 강탈 스킬을 이용해야 합니다.
땅을 방패로 찍어서 충격파를 전방에 날리기도 하고 수류탄을 던지기도 합니다.
록슨 경비대 폭탄을 맞으면 웹슈터가 꽤오래 마비됩니다.

▶ 언더그라운드 검사
길어지는 검으로 전투하는 검사입니다.
몸동작이 빠르고 넓은범위를 커버하는 공격을 합니다.
다른 적들과 조합되면 난이도를 상당히 올립니다.

▶ 언더 그라운드 저격수
레이저 포인트로 저격을 하고 있습니다.
멀리서도 총을 쏠수 있고 데미지가 상당히 높습니다.
적 진형이 들어갈때는 우선으로 쓰러트려야 하는 적입니다.

▶ 언더 그라운드 브루트
이 게임의 최종 최강 유닛입니다.
방패와 망치로 공격하며 근접공격은 당연히 안통하고 방패로 웹슈터도 막습니다.
베놈공격을 하면 방패는 없어지지만 도끼창은 남아서 계속 휘두룹니다.
시간이 지나면 방패를 다시 만들고 돌진공격까지 합니다.